一、實驗目的
(一)初步掌握骨髓細胞染色體標本常規制作和觀察的方法。
(二)觀察幾種實驗動物染色體核型。
二、實驗材料
(一)物件：小白鼠 (Mus musculus)、大 白 鼠 (Rattus norvegicus)、家兔(Oryctolagus cuniculus)、中華大蟾蜍 (Bufo bufogargarizans)。
(二)器材：顯微鏡、離心機、天平、解剖器械、注射器及5號針頭、離心管、染色缸、預冷載玻片、酒精燈、記號筆、恆溫水浴箱或溫箱。
（三) 試劑: 秋水仙素 (200μg\/mL)、低滲液(\/L KCl)、固定液(甲醇:冰乙酸=3:1，現用現配)、姬姆薩 (Giemsa) 染液。
三、實驗原理
用適量秋水仙素溶液注入動物體內，抑制分裂細胞紡錘體的形成，從而積累了大量的處於分裂中期相的骨髓細胞。
由骨髓細胞取材，不僅量多，而且分裂活躍，其染色體標本的製片可直接從骨髓中取出細胞，經空氣乾燥製片。
四、實驗步驟
(一)小白鼠骨髓細胞染色體制備及觀察
1.秋水仙素處理：取健康小鼠，在實驗前5~6 小時給予腹腔注射秋水仙素(4μg\/g 體重)。
2.取材：用頸椎脫臼斷髓法處死小鼠。剪開後肢大腿上的面板和肌肉，剝除肌肉，從膝關節至髂關節處分離下股骨。用衛生紙擦淨骨上殘餘的肌肉和血液。
3.收集細胞：在股骨兩端剪去少量骨質(約2mm，不可多剪，以防骨髓細胞過多損失)，暴露骨髓腔。以鑷子夾住股骨中部，用注射器吸取2~3mL預溫37℃的低滲液，將針頭從股骨一端插入骨髓腔，緩緩衝洗腔內骨髓至離心管中，直至骨骼發白為止。
4.低滲處理：加入預溫37°C的低滲液至4mL，用吸管反覆吹打，以使細胞均勻分散並與低滲液充分接觸。吹打後，置37℃恆溫水浴箱或溫箱中低滲處理30分鐘。
5.預固定：取出離心管，加入1mL新配製的固定液，用吸管輕輕吹打混勻，離心10分鐘(800~1000r\/min)。棄上清液，留沉澱物~。
6.固定：加入新鮮固定液5mL，用吸管將沉澱物輕輕吹勻懸浮，室溫放置30分鐘。離心10分鐘。
7.再固定：方法同固定，有限時可省略。
8.製備細胞懸液：棄上清液，留下沉澱物，加入新鮮固定液至~(視細胞多少而定)，混勻後即為細胞懸液。
9.滴片：用吸管吸取細胞懸液，從離載玻片（冰片）20~30cm的高度處滴下，每片滴2~3滴（不要重疊），然後順玻片斜面用口輕輕吹散，立即在酒精燈火焰上烤乾或晾乾。
10.染色：把乾燥的製片插入裝有10%Giemsa染液的染缸內，染色10~15分鐘後取出，流水緩緩衝洗玻片，晾乾、鏡檢。
11.觀察：先在低倍鏡下找到分裂相較多的區域，轉高倍鏡選分散適中、不重疊的中期分裂相後再換油鏡仔細觀察其形態特徵。
12.分片計數法進行染色體計數：為避免重複和遺漏，在計數前先按該細胞的染色體自然分佈狀態，大致劃分為幾個區域，然後按順序數出各區染色體的實際數目，最後加在一起即為該細胞染色體數目。
(二)實驗動物染色體核型的觀察
1.家兔正常體細胞核型：2n=44，其雄性染色體為XY、雌性為XX。油鏡下可見三種型別的染色體：中央、亞中和近端著絲粒染色體。按照染色體之大小、著絲粒的位置，可將染色體分為五組。
組號：A組；染色體號：1-2號；形態大小：最大；著絲粒位置：中央。
組號：B組；染色體號：3-8號+X；形態大小：較大；著絲粒位置：亞中、X在5與6之間。
組號：C組；染色體號：9-13號；形態大小：中等；著絲粒位置：9號中央、餘為亞中。
組號：D組；染色體號：14-17號；形態大小：較小；著絲粒位置：中央。
組號：E組；染色體號：18~21號+Y；形態大小：最小；著絲粒位置：近端、Y在19與20之間。
2.大白鼠正常體細胞核型：2n=42，雄性為XY型，雌性為XX型。油鏡下染色體形態也分為中央、亞中、近端著絲粒三種型別。可分為四組。
組號：A組；染色體號：1-2號；形態大小：最大；著絲粒位置：1號亞中，2號近端。
組號：B組；染色體號：3-10號+X；形態大小：較大；著絲粒位置：3號亞中，餘為近端，X在4-5號之間。
組號：C組；染色體號：11-18號；形態大小：中等；著絲粒位置：12、14、18亞中，餘為中央。
組號：D組；染色體號：19-20號+Y；形態大小：最小；著絲粒位置：中央，Y排在19號之前。
3.中華大蟾蜍正常體細胞核型：2n=22，由中央著絲粒染色體、亞中著絲粒染色體組成。可將染色體分為4組。
組號：A組；染色體號：1-2號；形態大小：最大；著絲粒位置：中央。
組號：B組；染色體號：3-6號；形態大小：較大；著絲粒位置：3、4號為亞中；5、6號為中央，6號長臂端部有隨體。
組號：C組；染色體號：7-10號；形態大小：較小；著絲粒位置：亞中。
組號：D組；染色體號：11號；形態大小：最小；著絲粒位置：中央。
注：第10對同型染色體為ZZ\/ZW型性染色體，用特殊染色法才可顯示。
四、作業與思考題
(一)作業
1.用簡明圖解方法表示小白鼠骨髓細胞染色體制備過程。
2.繪小白鼠染色體分裂中期圖，寫出2n=?。
(二)思考題
小白鼠、家兔、大白鼠、中華大蟾蜍染色體形態有何不同？