一、實驗目的

瞭解實驗室的一般規則,掌握一般玻璃儀器的洗滌方法,刻度吸量管的使用、溶液混勻法等基本技術。

二、內容與方法

(一)玻璃儀器的清洗

生化實驗常用各種玻璃儀器,其清潔程度直接影響實驗法果的準性,因此,清潔玻璃儀器不僅是實驗前後的常規工作,也是項重要的技術性工作,清洗玻璃儀器的方法很多,需根據實驗要求、汙物的性質和沾汙程度選用合適的清潔方法。

1.新購玻璃儀器的清洗:新購玻璃儀器,其表面附有鹼質,先用肥皂水刷洗,用流水沖洗淨,浸泡於1%一2%鹽酸中過夜;用流水沖洗淨,後用深水沖洗2-3次,乾燥備用。

2.使用過的玻璃儀器的清洗

(1)一般玻璃儀器:如試管、燒杯,錐形瓶等,先用自來水洗刷,用肥皂水或去汙粉刷洗,再用自來水反覆沖洗,去盡肥皂水或去汙粉,最後用蒸餾水淋洗2~3次,乾燥備用。

(2)容量分析儀器:吸量管、滴定管、容量瓶等,先用自來水沖洗,待瀝乾後,再用鉻酸洗液浸泡數小時,然後用自來水充分沖洗,最後用蒸餾水淋洗2-3次,乾燥備用。

(3)比色杯:使用完畢立即用自來水反覆沖洗。沖洗不乾淨時,用鹽酸或適當溶劑沖洗,再用自來水沖洗。避免用鹼液或強氣化劑清洗,切忌用試管刷或粗糙布(紙)擦拭。

上述所有玻璃器材洗淨後,以倒置後容器壁不掛水珠為乾淨的標準。

(二)玻璃儀器的乾燥

1.晾乾:不急用的玫璃儀器洗淨後,可瀝盡水分,倒置於無塵的乾燥處,讓其自然風乾。

2.加熱烘乾:一般玻璃儀器洗淨並瀝盡水分後,可置於電烘箱中烘烤,溫度控制在105一110℃,烘1個小時左右。但帶有刻度的量器不宜在高溫下烘烤。有蓋(塞)的玻璃儀器,如容量瓶,稱量瓶等,應當去蓋(塞)後烘烤。

三、吸量管的種類

1.奧氏吸量管:這類吸量管的特點是在同一容量的各類吸量管中,其容量表面積最小,故準確性最高。奧氏吸量管上只有一個刻度,放液時殘留於管尖的液體必須吹出。它常用於量取黏度較大的液體(如血液等),其規格有、1ml、2ml、3ml、5ml等。

2.移液管(移液吸量管):每根移液管上只有一個刻度,放液時任其自然流出後,讓管尖接觸容器內壁15-30s,管尖殘留液體不得吹出。其規格有10ml、20ml、25ml、50ml等。

3.刻度吸量管:這類吸量管帶有許多分刻度,刻度標記有自下而上和自上而下兩種,供量取10ml以下任意休積的液體。其規格有、、、、1ml、2ml、5ml、10ml等。

刻度吸量管有兩種型別:①全流出式刻度吸量管。該量管刻度標至尖端。刻度容量包括流出的全部液體,放液時而將管尖殘留液體吹出(這種量管在管上端有些標有“吹\"字),值得注意的是有些標有“快”字,表明此吸量管檢校時,已校正過尖端殘留液的誤差,因此放液時不能吹出管尖殘留液體。②不完全流出式刻度吸量管。這種吸量管上有零刻度,又有總刻度。使用時,以刻度為準,不能放液至最後的刻度線以下。

為了便於準確、快速地選取所需的吸量管,國際標準化組織統一規定,在刻度吸量管的上方要印有各種彩色環,以示容積區別。各標準刻度吸量管的色標和環數如下:

標準容量:,色標:紅,環數:單。

標準容量:,色標:黑,環數:單。

標準容量:,色標:白,環數:雙。

標準容量:,色標:紅,環數:雙。

標準容量:1ml,色標:黃,環數:單。

標準容量:2ml,色標:黑,環數:單。

標準容量:5ml,色標:紅,環數:單。

標準容量:10ml,色標:橘紅,環數:單。

標準容量:25ml,色標:白,環數:單。

標準容量:50ml,色標:黑,環數:單。

不完全流出式吸量管在單環或雙環上方還加印一條寬1~的同色彩環,便於和完全流出式刻度吸量管相區別。

四、吸量管的使用

吸量管的使用方法如下:

1.執管:將中指和拇指拿住吸量管上部,食指按住吸量管上口以控制流速:刻度數字應對向操作者。

2.取液:把吸量管插入液體內(切忌懸空,以兔液體吸入洗耳球內),用洗耳球吸取液體至所取液量的刻度上端1~2cm處,然後迅速用食指按緊吸量管上口,使管內液體不再流出。

3.調刻度:將已取液體的吸量管提出液麵,用濾紙片吸乾管尖外壁液體,然後垂直移動吸量管於容器內(管尖懸離容器內液麵)。用食指控制液體流至所需刻度(液體凹面、視線和刻度應在同一水平面上),按緊吸量管上口。

4.放液:放鬆食指,讓液體自然流入容器內。管尖應接觸容器內壁(與內壁呈35ᵒ—40ᵒ角),但不應插入容器內的原有液體之中,以免汙染吸量管及試劑。

5.洗滌:吸取血液、尿、組織樣品及黏稠試劑的吸量管在用後應及時用自來水沖流乾淨,吸取一般試劑的吸量管可不必馬上衝洗,待實驗完畢後,用自來水沖洗乾淨,晾乾,再浸泡於鉻酸洗液中。數小時後,再用流水衝淨,最後用蒸餾水沖洗,晾乾備用。

五、吸量管的選用原則

1.量取整數體積液體,應選用奧氏吸量管,如量取體積較大,可用移液管。

2.選用與取液量最接近的吸量管,如取液體,應選用刻度吸量管,而不能用刻度的吸量管,以此減小誤差。

3,在同一生化定量實驗中,如幾個試管需加入不同量的同一種液體時,要根據加入液體的酌情選用吸量管。如各管加入的液體量為、,及時,應選用一支與最大取液量接近的刻度吸量管,即1ml刻度吸量管。但另一種情況卻不能這樣做,如各管所加入液體的為1ml、2ml、5ml及8ml時,則不能選用一支10ml的刻度吸量管吸取不同的量加入各管中,分別用一支1ml、2ml、5ml及10ml刻度吸量管吸取,因為用10ml刻度吸量管量取1ml、2ml及5ml溶液時,因管內徑太大,其刻度是很難控制得準確的。

4.當取液量不足吸量管的滿刻度時,如用1ml刻度吸量管量取液體,應選用吸量管上端刻度(指刻度到尖端者),若用1ml刻度不到尖端的吸量管,上端或下端刻度都可以使用。

六、溶液的混勻

樣品與試劑的混勻是保證化學反應充分進行的一種有效措施。為使反應體系內各物質迅速地混勻,必須藉助於外加的機械作用。混勻時須防止容器內液體濺出或被汙染,嚴禁用手指直接堵塞試管口或錐形瓶口震搖。混勻的方式大致有下面幾種,可根據使用的器皿和液體容量而選用:

1:旋轉混勻法:手持容器,使溶液作離心旋轉。該法適用於未盛滿液體的試管或小口器皿,如錐形瓶。旋轉試管時宜用手腕旋轉。

2.指彈混勻法:手持容器,手用力前後搖動使內容物混勻。也可用左手持試管上端,用右手指輕輕彈動試管下部,使管內溶液作旋渦運動;或用右手持試管上端,在左手掌上打擊的方法混勻溶液。

3.顛倒混勻法:該法適用於有塞的容量瓶及有塞試管溶液的混勻。試管溶液混勻時可用聚乙烯等薄膜封口,再用手按住管口顛倒混勻。

4.吸量管混勻法:用吸量管將溶液反覆吸放數次,使溶液充分混勻。

5玻璃攪動法:該法活用於燒杯、量筒內容物的混勻,如固體試劑的溶解和混勻。

其他尚有電磁攪拌混勻法和震盪器混勻法等。

七、微量移液器的使用方法

1.標準操作:適用的液體:水、緩衝液、稀釋的鹽溶液和酸鹼溶液。

(1)按到第一檔,垂直插入液麵下幾毫米。

(2)緩慢鬆開控制按鈕,否則液體進入吸頭過速,導致液體倒吸入移液器內部而吸入體積減少。

(3)壓出液體時貼壁並有一定角度,先按到第一檔,稍微停傾1s後,待剩餘液體聚集後,再按到第二檔將剩餘液體全部壓出。

2.黏稠或易揮發液體的移取:在移取黏稠或易揮發的液體時、很容易導致體積誤差較大,為了提高移液準確性,建議採取以下方法:

(1)移液前先用液體預溼吸頭內部,即反覆吸打液體幾次使吸頭預溼,吸液或排出液體時最好多停留幾秒。尤其對於移取體積大的液體(如1ml),建議將吸頭預溼後再移取。

(2)採用反相移液法:吸液時按到第二檔,慢慢鬆開控制按鈕,按壓液體時按到第二檔,部分液體殘留在吸頭內。

3,常見的錯誤操作

(1)吸液時:移液器本身傾斜,導致移液不準確(應垂直吸液,慢吸慢放)。

(2)裝配吸頭時,用力過猛,導致吸頭難以脫卸(無需用力過猛,選擇與移液器相匹配的吸頭)。

(3)平放帶有殘餘液體吸頭的移波器(應將移液器掛在移液器架上)。

(4)用大量程的移液器移取小體積樣品(應該選擇合適量程範圍的移液器)。

(5)直接按到第二檔吸液(應該按照上述標準方法操作)。

(6〉使用丙酮或強腐性的液體清洗移液器(應該參照正確清洗方法操作)。

附錄 化學試劑的規格與保管

(一)化學試劑的規格

化學試劑根據其質量分為各種規格(品級),一般化學試劑的分級見下表:

級別:一級,名稱:優級純,保證試劑,簡寫GR,純度和用途:純度高,雜質含量低,適用於研究和配製標準液。

級別:二級,名稱:分析純,簡寫:AR,純度和用途:純度較高,雜質含量較低,適用於定性定量分析。

級別:三級,名稱:化學純,簡寫:CP,純度和用途:質量略低於二級,用途同上。

級別:四級,名稱:實驗試劑,簡寫:LR,純度和用途:質量較低,比工業用的高,用於一般定性實驗;名稱:生物試劑,簡寫:BR,純度和用途:用於生物化學研究和檢驗;名稱:生物染色素,純度和用途:主要用於生物組織學、細胞學和微生物染色,供顯微鏡檢查。

其他還有一些不屬於表中規格的試劑,如純度很高的光譜純、層析純、電泳純及純度較低的工業純等。

實驗的試劑需按試驗要求規格進行選擇,如用於精確定量分析或配製標準液時,需用二級以上的化學試劑。有的實驗不需用更高階的試劑也可達到要求的,應儘量不用,如配清潔液只需要粗硫酸。

(二)化學試劑的保管

化學試劑一般應按其性質分別存放於陰涼、避光、通風的乾燥處。

須特殊保管的常用試劑見下表:

保管要求:需要密封,防止潮解吸溼;試劑:氧化鈣、氯化鈣、氫氧化納、氫氧化鉀、碘化鉀、三氯化鐵、三氯醋酸、濃硫酸。

保管要求:需要密封,防止失水風化;試劑:結晶硫酸鈉、硫酸亞鐵、含水磷酸氫二鈉、硫代硫酸鈉。

保管要求:需要密封,防止揮發;試劑:氨水、氯仿、醚、碘、麝香草酚、甲醛、乙醇、丙酮。

保管要求:需要密封,防止吸收CO₂;試劑:氫氧化鈉、氫氯化鉀。

保管要求:需要密封,防止氧化;試劑:硫酸亞鐵、醚、酚、醛類、抗壞血酸和一切還原劑。

保管要求:需要密封,防止變質;試劑:四苯硼鈉、丙酮酸鈉、乙醚。

保管要求:需要避光,防止見光變色;試劑:硝酸銀(變黑)、酚(變淡紅)、茚三酮(變淡紅)。

保管要求:需要避光,防止見光分解;試劑:過氧化氫、氯仿、漂白粉、氰氫酸。

保管要求:需要避光,防止見光氧化;試劑:乙醚、醛類、亞鐵類鹽和一切還原劑。

保管要求:特殊方法保管,防震防爆;試劑:苦味酸、硝酸鹽類、過氯酸、疊氨鈉

保管要求:特殊方法保管,防劇毒;試劑:氰化鉀(鈉)、汞、砷化物、溴、鈉化合物及放射性元素。

保管要求:特殊方法保管,防火;試劑:乙醚、甲醇、乙醇、丙酮苯、石油醚、汽油、二甲苯、苯強酸、強鹼。

保管要求:特殊方法保管,防腐蝕,防止高溫失效;試劑:一切生物製品。如免疫血清、菌液、標準參考血清、酶和輔酶等,需冷藏。

易燃試劑:應存放在遠離火源、陰涼、通風處。

易爆試劑:受撞擊、熱、強烈摩擦或與其他物質接觸後易爆炸,應注意。

腐蝕性試劑:應密封存放在陰涼處。

劇毒和麻醉試劑:需專人保管。

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